問：保健食品之褪黑素含量測定方法
答：1 范圍
本方法規(guī)定了以褪黑素為功效成分的膠囊或片劑包裝的保健食品中褪黑素的測定方法。
本方法適用于以褪黑素為功效成分的膠囊或片劑包裝的保健食品中褪黑素的含量測定。
本方法高效液相色譜－紫外檢測法的檢出限為0.5mg;取樣量0.5g時，檢出濃度為0.07mg/kg.本方法高效液相色譜－熒光法的檢出限為30pg，線性范圍為0.05～0.50ng。
2 原理
試樣中的褪黑素經(jīng)溶解、稀釋、過濾后，使用具有紫外檢測器的高效液相色譜儀檢測，根據(jù)色譜峰的保留時間定性，外標法定量。
（高效液相色譜－紫外檢測法）
1 試劑
除非另有說明，在分析中僅使用確定為分析純的試劑和蒸餾水或去離子水或相當純度的水。
（1） 甲醇：色譜純。
（2） 無水乙醇：優(yōu)級純。
（3） 三氟乙酸：優(yōu)級純。
（4） 高效液相色譜流動相：甲醇：水：三氟乙酸＝45：55：0.05
（5） 褪黑素（Melatonin）標準品：Sigma公司產(chǎn)品。
（6） 褪黑素標準溶液的配制
精確稱量30mg褪黑素標準品于100mL容量瓶中，加入70％乙醇溶解后定容至刻度。準確吸取2mL上述溶液于10mL容量瓶中，加入流動相（4）定容至刻度，此溶液濃度為0.060mg/mL。
2 儀器
（1） 高效液相色譜儀：附紫外檢測器。
（2） 超聲波清洗器。
（3） 離心機。
3 分析步驟
（1） 試樣處理：使用研缽將膠囊研成粉末并使之混合均勻。
（2） 精確稱量約一粒膠囊的重量于10mL容量瓶中，以70％乙醇定容至刻度，使用超聲波清洗器提取10min。將提取液離心至澄清。準確量取上清液2mL于10mL容量瓶中，以流動相定容至刻度，混勻后經(jīng)0.45μm濾膜過濾后進行色譜分析。
（3） 測定
3.1 液相色譜參考條件
3.1.1 色譜柱：C18, 4.6mm×250mm。
3.1.2 紫外檢測器：檢測波長：222nm。
3.1.3 流速：0.8mL/min。
3.1.4 柱溫：室溫
3.2 色譜分析
量取10μL標準溶液及試樣凈化液注入高效液相色譜儀中，以保留時間定性，以試樣峰高或峰面積與標準比較定量。
4 分析結(jié)果的表述
（1）計算
h 10
—×c×10×—×1000
hs 2
X＝—————————
M
式中：
X-試樣中褪黑素的含量，mg/kg；
h-試樣的峰高或峰面積；
hs-標準的峰高或峰面積；
c-褪黑素標準溶液的濃度，mg/mL；
m-試樣質(zhì)量，g。
（2）結(jié)果表示：計算結(jié)果保留二位有效數(shù)字。
5 技術(shù)參數(shù)
準確度：本方法的回收率在92.7%～102.6%之間。
精密度：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的5％。