問(wèn)：保健食品之褪黑素含量測(cè)定方法
答：1 范圍
本方法規(guī)定了以褪黑素為功效成分的膠囊或片劑包裝的保健食品中褪黑素的測(cè)定方法。
本方法適用于以褪黑素為功效成分的膠囊或片劑包裝的保健食品中褪黑素的含量測(cè)定。
本方法高效液相色譜－紫外檢測(cè)法的檢出限為0.5mg;取樣量0.5g時(shí)，檢出濃度為0.07mg/kg.本方法高效液相色譜－熒光法的檢出限為30pg，線性范圍為0.05～0.50ng。
2 原理
試樣中的褪黑素經(jīng)溶解、稀釋、過(guò)濾后，使用具有紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。
（高效液相色譜－紫外檢測(cè)法）
1 試劑
除非另有說(shuō)明，在分析中僅使用確定為分析純的試劑和蒸餾水或去離子水或相當(dāng)純度的水。
（1） 甲醇：色譜純。
（2） 無(wú)水乙醇：優(yōu)級(jí)純。
（3） 三氟乙酸：優(yōu)級(jí)純。
（4） 高效液相色譜流動(dòng)相：甲醇：水：三氟乙酸＝45：55：0.05
（5） 褪黑素（Melatonin）標(biāo)準(zhǔn)品：Sigma公司產(chǎn)品。
（6） 褪黑素標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
精確稱(chēng)量30mg褪黑素標(biāo)準(zhǔn)品于100mL容量瓶中，加入70％乙醇溶解后定容至刻度。準(zhǔn)確吸取2mL上述溶液于10mL容量瓶中，加入流動(dòng)相（4）定容至刻度，此溶液濃度為0.060mg/mL。
2 儀器
（1） 高效液相色譜儀：附紫外檢測(cè)器。
（2） 超聲波清洗器。
（3） 離心機(jī)。
3 分析步驟
（1） 試樣處理：使用研缽將膠囊研成粉末并使之混合均勻。
（2） 精確稱(chēng)量約一粒膠囊的重量于10mL容量瓶中，以70％乙醇定容至刻度，使用超聲波清洗器提取10min。將提取液離心至澄清。準(zhǔn)確量取上清液2mL于10mL容量瓶中，以流動(dòng)相定容至刻度，混勻后經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后進(jìn)行色譜分析。
（3） 測(cè)定
3.1 液相色譜參考條件
3.1.1 色譜柱：C18, 4.6mm×250mm。
3.1.2 紫外檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)：222nm。
3.1.3 流速：0.8mL/min。
3.1.4 柱溫：室溫
3.2 色譜分析
量取10μL標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣凈化液注入高效液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。
4 分析結(jié)果的表述
（1）計(jì)算
h 10
—×c×10×—×1000
hs 2
X＝—————————
M
式中：
X-試樣中褪黑素的含量，mg/kg；
h-試樣的峰高或峰面積；
hs-標(biāo)準(zhǔn)的峰高或峰面積；
c-褪黑素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mg/mL；
m-試樣質(zhì)量，g。
（2）結(jié)果表示：計(jì)算結(jié)果保留二位有效數(shù)字。
5 技術(shù)參數(shù)
準(zhǔn)確度：本方法的回收率在92.7%～102.6%之間。
精密度：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的5％。